Кръвен тест за антитела

За много показания е даден кръвен тест за антитела. Лекарят може да предпише такова изследване за чести инфекциозни заболявания на пациента, заподозрени полово предавани инфекции, инвазии на хелминти, заболявания на щитовидната жлеза. Антителата в кръвта на бременна жена могат да показват наличието на резус конфликт. И така, какво е това изследване и кога е необходимо да се вземе кръвен тест за антитела?

Тест за антитела

Човешкото тяло е постоянно атакувано от различни инфекции. За да защити организма и да предотврати болести, имунната система на човека произвежда антитела. Анализът на антитела дава възможност да се определи състоянието на имунната система на човека, причината за патологичните промени в организма.

Антителата са специфични специфични протеини (имуноглобулини), които са способни да свързват инфекциозни антигени. Те се произвеждат от кръвни лимфоцити. По време на изследването се определя наличието на антитела към определени патогени. Резултатите от антитела показват налични инфекции и предишни заболявания.

Класове на антитела

Различават се антитела от пет класа - IgA, IgG, IgD, IgE, IgM. Всеки клас антитела действа на строго определени антигени..

IgM антителата се наричат ​​"тревожни имуноглобулини". Броят им рязко нараства в самото начало на заболяването. Тези антитела бързо реагират на въвеждането на инфекция в организма и осигуряват първична защита срещу него..

IgA антителата са отговорни за локалния имунитет на лигавицата. Тези имуноглобулини се активират при инфекции по кожата, остри респираторни инфекции. В допълнение, нивото на IgA антитела се увеличава при интоксикация, хронични чернодробни патологии и алкохолизъм..

IgE антителата са антипаразитни и антиинфекциозни имуноглобулини. Те осигуряват защита на тялото срещу патогенни вируси, бактерии, гъбички. Също така тези антитела неутрализират токсините, които причинява причинителят, са отговорни за имунитета на плода при бременна жена. Благодарение на техните ефекти човек развива дългосрочен имунитет, който предотвратява повторната инфекция.

Въз основа на резултатите от кръвен тест за антитела, специалист може да определи кои антигени влияят отрицателно на тялото на пациента и кои имуноглобулини могат да елиминират инфекцията. Понякога антителата срещу определени патогени остават завинаги в човешкото тяло. Това изследване дава възможност да се установи с висока точност онези заболявания, които човек е имал преди.

Показания за анализ

Обикновено се предписва тест за антитела за откриване на вирусен хепатит, херпесен вирус, хламидия, уреаплазмоза, лептоспироза, цитомегаловирус, тетанус, ХИВ инфекция, дифтерия, сифилис и някои други заболявания.

С помощта на това изследване може да се определи още един изключително важен показател - наличието на автоантитела в кръвта. Тези антитела се образуват срещу антигени на самото човешко тяло - рецептори, фосфолипиди, фрагменти от ДНК, хормони. Определянето на наличието на автоантитела дава възможност за диагностициране на автоимунни заболявания. Доста е трудно да се открият автоимунни патологии без този тест за антитела..

Подготовка за анализ

Кръвен тест за антитела може да се направи в диагностични, медицински центрове, лаборатории в специализирани отделения на болници. Не забравяйте да направите това, трябва да имате препоръка от лекаря, която ще посочи кои имуноглобулини трябва да бъдат определени.

В деня преди анализа е необходимо да се изключи от диетата пикантни, пържени, солени, мазни храни, алкохолни напитки, а също така да се избягва пушенето и приемането на лекарства. Този анализ не е необходимо да се взема след физиотерапевтични процедури, томография, ултразвук, флуорография. Кръв от вена за изследване се дава сутрин на празен стомах..

Декодиране на кръвен тест за антитела

Дешифрирането на кръвен тест за антитела трябва да се извършва от лекар, който взема предвид всички допълнителни фактори за поставяне на диагноза. Но всеки може сам да провери показателите си, за да определи как съответства на нормата.

IgA имуноглобулини

Тези антитела се намират на повърхността на лигавичните тъкани, в урината, жлъчката, слюнката, млякото, коластрата, както и в слъзния, стомашно-чревния, бронхиалния секрет. Основната функция на тези антитела е да неутрализират вирусите. Те предпазват дихателните и пикочните пътища, стомашно-чревния тракт от инфекция.

Обикновено нивото на IgA имуноглобулини в кръвта на деца под 12 години е 0,15–2,5 g / l, при по-големи деца и възрастни - 0,4–3,5 g / l.

Увеличение на този показател се проявява при алкохолизъм, муковисцидоза, туберкулоза, ревматоиден артрит, цироза на черния дроб, хроничен хепатит, хронични гнойни инфекции на храносмилателната система.

Намаляване на IgA имуноглобулините може да се наблюдава при злокачествена анемия, атопичен дерматит, радиационна експозиция, употребата на определени лекарства (цитостатици, имуносупресори).

IgM имуноглобулини

Тези имуноглобулини са първите, които реагират на инфекция в организма и задействат имунната защита. Те се произвеждат в плазмени клетки, неутрализират бактериите и вирусите в кръвния серум.

Според декодирането на кръвен тест за антитела, нормалната стойност на IgM имуноглобулини в кръвта на деца под 10 години е 0,8–1,5 g / l, при мъжете - 0,6–2,5 g / l, при жените - 0,7– 2,8 g / l.

Увеличаване на съдържанието на IgM антитела възниква при вътрематочни инфекции при новородени, паразитни заболявания, заболявания на храносмилателната и дихателната система на остро и хронично протичане. Намаляване на нивото на тези антитела може да бъде с гастроентеропатии, изгаряния, лимфом.

IgG имуноглобулини

Тези антитела се активират, когато се появят алергични реакции и бактериални инфекции в организма..

Нормалните нива на IgG за деца под 10 години са 7,3–13,5 g / l, за по-големи деца и възрастни - 8,0–18,0 g / l.

Нивото на IgG антитела се повишава при саркоидоза, системен лупус еритематозус, ревматоиден артрит, туберкулоза и HIV инфекция. Намаленото ниво на тези антитела се проявява с новообразувания на лимфната система, алергични реакции, наследствена мускулна дистрофия.

Тест за резус на антитела

Резус антитела (резус-фактор) - специален протеин, който се намира на повърхността на червените кръвни клетки. Тези хора, които имат този протеин, се наричат ​​Rh-позитивни. Но 15% от хората, които се наричат ​​Rh-отрицателни, нямат този протеин. Отрицателният резус не вреди на човешкото здраве. Ситуацията става опасна, когато Rh-отрицателна бременна жена има Rh-положителна кръв. В този случай съществува възможност антителата на Rh отрицателната майка да попаднат в кръвния поток на детето. В резултат на това бебето може да развие доста тежки патологии на черния дроб, мозъка, бъбреците.

За да контролират подобни ситуации, всички Rh-отрицателни бременни жени провеждат кръвен тест за Rh антитела. Още при първото повикване на лекар се препоръчва на жена да вземе кръвен тест за антитела. След това, през първата половина на бременността, бъдещата майка преминава кръвен тест за Rh антитела всеки месец. През втората половина на бременността това проучване се провежда два пъти месечно. Ако е необходимо, се прилага специална терапия на плода и новороденото.

Антитела срещу коронавирус: надежди и реалност

Тестът за антитела срещу коронавирус днес се превръща в мания и върховна мечта на много хора, които остават у дома. Но имаше, през зимата имаше подозрителна кашлица и SARS протичаше точно като лека форма на COVID-19, а след това останете вкъщи, носете маска, страхувайте се да отидете да посетите баба си и страдате от физическо бездействие! Но силен организъм, със сигурност беше „това“. Сега, ако имаше такъв магически тест, който би показал, че вече сте болни и сега не само сте защитени от инфекция, но и безопасни за другите. Това ви позволява да направите тест за антитела. Вярно, с куп нюанси и резерви. Как работи този метод и защо толкова много надежди и толкова много съмнения са свързани с него, разбра MedAboutMe.

Какво представляват антителата?

За да разпознае и унищожи клетките на патогенни микроорганизми, нашата имунна система произвежда антитела. Това са доста големи плазмени протеини, които имат Y-образна форма. Те се различават помежду си по области, по които се свързват с протеини на повърхността на вируси, бактерии, гъбички и паразити. След като антителата се свържат например с вирусна частица, те или сами я унищожават, или привличат други специализирани клетки на имунната система, за да помогнат. Антителата също се наричат ​​имуноглобулини, за кратко - Ig.

По-голямата част от имуноглобулините включват две тежки протеинови вериги и две леки. Някои антитела присъстват в кръвната плазма под формата на мономери - отделни Y-образни протеини, а някои предпочитат да съществуват под формата на димери (комплекс от две молекули) или дори пентамери (от пет) или хексамери (от шест протеинови молекули).

Антителата се произвеждат от В-лимфоцити. Един В-лимфоцит може да произведе само един вид антитяло. Така че в човешкото тяло може да има поне милион В-лимфоцити, които произвеждат различни антитела.

В-лимфоцитите образуват специфични В-рецептори, чрез които имунните клетки определят кои В-лимфоцити трябва да бъдат активирани, за да произвеждат антитела.

Видове човешки антитела

При бозайниците, тоест и при хората има 5 класа антитела, които са получили името си по типа на тежки вериги:

  • IgA - антитела от този клас се намират главно в тайните на нашето тяло. Те могат да бъдат открити в слюнката, слуз, произведена в носа, в кърмата и в храносмилателния сок. В плазмата има сравнително малко от тях - само 10-15% от общия обем на всички Ig. Това е първата ни линия на защита на лигавиците. Самият IgA няма бактерицидни свойства, тоест не унищожава бактериите, но те неутрализират токсините, които тези бактерии произвеждат. Те също активират защитния имунен отговор на организма срещу инвазия на вируси. Именно IgA осигуряват специфичния имунитет на новородените, които получават с майчиното мляко.
  • IgE - всички страдащи от алергия знаят за тези антитела. Именно тези Igs играят водеща роля в развитието на алергична реакция, която е проява на свръхчувствителност на имунната система. При страдащите от алергия IgE може да бъде 10 пъти по-висок, отколкото при обикновен човек. И IgE са отговорни за имунния отговор срещу глисти. Концентрацията на IgE също се увеличава при определени автоимунни заболявания, като псориазис или ревматоиден артрит.
  • IgM - това е много интересен клас антитела, актуални в момента. Когато патоген навлиза в тялото, именно тези имуноглобулини се формират първо. Това са най-тежкият Ig от всички. Те образуват пентамери от пет Y-образни протеинови молекули. Техните променливи участъци на разклонената опашка на стърчащите Y протеини се сравняват с набор от части от дизайнера, от които може да бъде изградена всяка конфигурация. Именно тази уникална конфигурация се формира при контакт на IgM с повърхностни протеини на вирус или бактерия. Ако има много IgM в кръвта на човек, например, до коронавирус, това означава, че инфекцията е в начален стадий - човекът е болен.
  • IgD - имуноглобулини от този тип в кръвната плазма са малко, около 0,25% от общия Ig обем. Учените смятат, че IgD работят заедно с IgM, допълвайки ги функционално.
  • IgG са нашите най-важни антитела в светлината на пандемията на коронавирус. Антитела от този клас в кръвта най-вече - 75% и това е основният вид имуноглобулин. Те се свързват с патогени, които влизат в тялото и по този начин водят до тяхното обездвижване и аглутинация. Когато IgG седи на повърхността на вирус, бактерии, гъбички, тези агресори влизат в зрителното поле на клетките на имунната система на фагоцити, които разпознават вредителя и го унищожават. IgG не само дефинира враговете, но и задейства система за допълване, което води до образуването на протеини, необходими за унищожаването на патогенни микроорганизми. IgG също неутрализира токсините. Те също се намират в кърмата и дори могат да преминат през плацентата, осигурявайки на бебето защита както преди раждането, така и през първите месеци от живота след тях. Наличието на IgG за специфична инфекция в кръвната плазма показва, че тялото не само се е срещнало с инфекциозен агент, но и вече е научило как да се справя с него.

И така, ензимният имуноанализ (ELISA) анализира наличието на антитела IgM и IgG. Ако в кръвната плазма има само IgM антитела, това означава, че човекът се е разболял наскоро и в момента е болен. Ако има и IgM и IgG, това означава, че борбата срещу инфекцията е в разгара си и имунната система вече произвежда антителата, необходими за унищожаване на вируса или бактериите. Ако в кръвната плазма се открие само IgG, това означава, че инфекцията е била, но тялото успешно я е победило, излекувана е, но все още помни как да се справи с нея.

За тези, които се чудят колко вариации на антитела могат да съществуват и дали тези варианти завършват по време на живота на един човек, нека уточним, че ДНК, която кодира променливите региони на антитела, съдържа 400 променливи гена, 12 гена за разнообразие и 4 свързващи гени., В различни комбинации те ви позволяват да кодирате повече от 200 хиляди разновидности на променливи региони. И това е освен промени в нуклеотидите на самите гени. Според учените човешкото тяло може да произведе 100 милиона различни антитела, които могат да разпознаят почти всяко съществуващо вещество, което е чуждо за нас. Това е достатъчно за очите на всеки, дори човек, който е много активно в контакт с инфекции.

Коронавирусни тестове

Когато пандемията едва започваше, основната идея беше да се идентифицират хора, заразени с коронавирус. Затова най-важното беше създаването на тест, който ви позволява да определите РНК на вируса в човешки секрети. Концентрацията на коронавирус в слюнката и в слузта от назофаринкса е много по-висока, отколкото в кръвта, така че това е намазка от носната кухина, която се взема за изследване, а не кръв от пръста.

Вече е известно, че по-често инфекцията SARS-CoV-2 протича безсимптомно. Остават обаче категории от населението, за които коронавирусната инфекция може да стане фатална. Следователно е толкова важно да се разбере кой днес, първо, няма да се разболее сам и второ, няма да се превърне в скрит източник на инфекция за хората в риск. И сега тестовете за антитела срещу коронавирус излизат на преден план.

Както бе споменато по-горе, основният интерес представляват IgG антитела. Неудобно е да се диагностицира заболяването чрез ELISA. IgM антителата не се появяват моментално, но през първите дни на заболяването. Ако човек обаче няма симптоми, но има IgM антитела, това показва безсимптомно протичане на заболяването.

С IgG антителата също не е лесно. Те се появяват, според CDC, 1-3 седмици след заразяването. Така че този тест е подходящ за тези, които са имали коронавирус (или нещо много подобно на него) поне преди няколко седмици.

Ти четеш много, а ние го оценяваме!

Оставете имейла си, за да получавате винаги важна информация и услуги, за да поддържате здравето си

Антитела

Антителата са протеини от глобулиновата фракция на човешки кръвен серум и топлокръвни животни, които се образуват в отговор на въвеждането на различни антигени (бактерии, вируси, протеинови токсини и др.) В организма и специфично взаимодействат с антигените, които са причинили образуването им. Свързвайки се с активните места (центрове) с бактерии или вируси, антителата предотвратяват тяхното размножаване или неутрализират отделените от тях токсични вещества. Наличието на антитела в кръвта показва, че тялото е взаимодействало с антигена срещу заболяването, което причинява. До каква степен имунитетът зависи от антителата и до каква степен антителата само придружават имунитета се решава във връзка с конкретно заболяване. Определянето на нивото на антителата в кръвния серум ни позволява да преценяваме интензивността на имунитета дори в онези случаи, когато антителата не играят решаваща защитна роля.

Защитният ефект на антителата, съдържащи се в имунните серуми, се използва широко при лечение и профилактика на инфекциозни заболявания (вж. Серопрофилактика, Серотерапия). Реакциите на антитела с антигени (серологични реакции) се използват при диагностицирането на различни заболявания (вж. Серологични изследвания).

съдържание

История

Дълго време за химичното. природата на А. знаеше много малко. Известно е, че антителата след прилагане на антиген се намират в кръвен серум, лимфа, тъканни екстракти и че те конкретно реагират със своя антиген. Наличието на антитела се преценява въз основа на онези видими агрегати, които се образуват при взаимодействие с антигена (аглутинация, утаяване) или чрез промяна в свойствата на антигена (неутрализиране на токсина, клетъчен лизис), но почти нищо не се знае кой химичен субстрат на антителата.

Благодарение на прилагането на ултрацентрифугиране, имуно-електрофореза и мобилност на протеини в изоелектричното поле, доказано е, че антителата принадлежат към класа на гама глобулини или имуноглобулини.

Антителата са нормални глобулини, образувани по време на синтеза. Имунните глобулини, получени чрез имунизиране на различни животни с един и същ антиген и при имунизиране на един и същи вид животни с различни антигени, имат различни свойства, точно както серумните глобулини от различни животински видове не са еднакви.

Класове имуноглобулини

Имуноглобулините се произвеждат от имунокомпетентни клетки на лимфоидните органи, те се различават по молекулно тегло, константа на утаяване, електрофоретична мобилност, съдържание на въглехидрати и имунологична активност. Има пет класа (или видове) имуноглобулини:

Имуноглобулини М (IgM): молекулно тегло от около 1 милион, имат сложна молекула; първите, които се появяват след имунизация или антигенна стимулация, оказват пагубно влияние върху микробите, които влизат в кръвта, допринасят за фагоцитозата им; по-слаби от имуноглобулини G, свързват разтворими антигени, бактериални токсини; се унищожават в организма 6 пъти по-бързо от имуноглобулини G (например при плъхове, полуживотът на имуноглобулин М е 18 часа, а този на имуноглобулин G е 6 дни).

Имуноглобулини G (IgG): молекулно тегло от около 160 000, те се считат за стандартни или класически антитела: те лесно преминават през плацентата; образува се по-бавно от IgM; най-ефективно се свързват разтворими антигени, особено екзотоксини, както и вируси.

Имуноглобулини А (IgA): молекулни тегла от около 160 000 или повече, се произвеждат от лимфоидната тъкан на лигавиците, инхибират разграждането на ензимите в клетките на тялото и устояват на патогенните ефекти на чревните микроби, лесно проникват в клетъчните бариери на тялото, съдържат се в коластрата, слюнката, сълзите, чревната слуз, потта, отделена от носа, в кръвта са в по-малки количества, лесно се свързват с клетките на тялото; IgA се появи, очевидно, в процеса на еволюция, за да предпази лигавиците от агресия от бактерии и да предаде пасивен имунитет на потомството.

Имуноглобулини Е (IgE): молекулно тегло от около 190 000 (според R. S. Nezlin, 1972); очевидно са алергични антитела - така наречените реагини (вижте по-долу).

Имуноглобулини D (IgD): молекулно тегло от около 180 000 (според R. S. Nezlin, 1972); в момента се знае много малко за тях.

Структура на антитела

Имуноглобулиновата молекула се състои от две неидентични полипептидни субединици - леки (L - от английски леки) вериги с молекулно тегло от 20 000 и две тежки (H - от английски тежки) вериги с молекулно тегло 60 000. Тези вериги, свързани чрез дисулфидни мостове, образуват основния мономер LH. В свободно състояние обаче такива мономери не се срещат. Повечето имуноглобулинови молекули са съставени от димери (LH)2, останалото е от полимери (LH)2n. Основните N-крайни аминокиселини на човешкия гама-глобулин са аспарагинова и глутаминова, а заешката - аланин и аспарагинова киселина. Портър (RR Porter, 1959), действайки върху папаиновите имуноглобулини, открива, че те се разлагат на два (I и II) Fab фрагменти и Fc фрагмент (III) с константа на утаяване 3,5S и молекулно тегло около 50 000. въглехидрати, свързани с Fc фрагмента. По предложение на експерти на СЗО беше установена следната номенклатура от фрагменти на антитела: Fab фрагмент - едновалентен, активно свързващ се с антигена; Fc фрагмент - не взаимодейства с антигена и се състои от С-крайни половини на тежки вериги; Fd фрагмент е сайт с тежка верига, който е част от фрагмента на Fab. Фрагмент от пепсинова хидролиза на 5S се предлага да се обозначи като F (ab)2, и едновалентният 3,5S фрагмент е Fab.

Специфичност на антителата

Едно от най-важните свойства на антителата е тяхната специфичност, която се изразява във факта, че антителата по-активно и по-пълно взаимодействат с антигена, с който тялото е стимулирано. В този случай комплексът антиген-антитяло има най-голяма сила. Антителата могат да различават малки промени в структурата на антигените. Когато използвате конюгирани антигени, състоящи се от протеин и включеното просто химическо вещество - хаптен, получените антитела са специфични за хаптен, протеин и протеин-хаптен комплекс. Специфичността се дължи на химическата структура и пространствения модел на антидетерминантите на антитела (активни центрове, реактивни групи), тоест частите на антителата, чрез които те се свързват с детерминантите на антигена. Броят на анти-детерминантите на антителата често се нарича тяхната валентност. И така, молекула на IgM антитела може да има до 10 валентности; молекулите на IgG и IgA антителата са двувалентни.

Според Караш (F. Karush, 1962), активните IgG центрове се състоят от 10-20 аминокиселинни остатъци, което е приблизително 1% от всички аминокиселини на молекула на антитела, и според Winkler (М. Н. Winkler, 1963), активните центрове се състоят от от 3-4 аминокиселинни остатъци. В състава им са открити тирозин, лизин, триптофан и др., Антидетерминантите очевидно се намират в амино-крайните половини на Fab фрагменти. Променливи сегменти от леки и тежки вериги участват във формирането на активния център, като последният играе основна роля. Може би леката верига участва само частично във формирането на активния център или стабилизира структурата на тежки вериги. Най-пълният антидетерминант се създава само от комбинация от леки и тежки вериги. Колкото повече точки на съвпадение има между антидетерминантите на антителата и детерминантите на антигена, толкова по-висока е специфичността. Различната специфичност зависи от последователността на аминокиселинните остатъци в активния център на антителата. Кодирането на огромно разнообразие от антитела по тяхната специфичност не е ясно. Портър дава три възможности за специфичност.

1. Образуването на стабилната част на имуноглобулиновата молекула се контролира от един ген, а променливата част от хиляди гени. Синтезираните пептидни вериги се комбинират в имуноглобулинова молекула под влияние на специален клетъчен фактор. Антигенът в този случай действа като фактор, който задейства синтеза на антитела.

2. Имуноглобулиновата молекула се кодира от стабилни и променливи гени. В периода на клетъчното делене настъпва рекомбинация на променливи гени, което определя тяхното разнообразие и променливостта на части от молекули на глобулин.

3. Генът, кодиращ променливата част на имуноглобулиновата молекула, се уврежда от определен ензим. Други ензими възстановяват щетите, но поради грешки позволяват различна последователност на нуклеотиди в рамките на даден ген. Това се дължи на различната аминокиселинна последователност в променливата част на имуноглобулиновата молекула. Има и други хипотези, например. Бърнет (Ф. М. Бърнет, 1971).

Хетерогенността (хетерогенността) на антителата се проявява по много начини. В отговор на прилагането на единичен антиген се образуват антитела, които се различават по афинитет към антигена, антигенните детерминанти, молекулното тегло, електрофоретичната мобилност и N-крайните аминокиселини. Груповите антитела към различни микроби причиняват кръстосани реакции към различни видове и видове салмонела, шигела, ешерихия, животински протеини, полизахариди. Произвежданите антитела са разнородни по своята специфичност по отношение на хомогенен антиген или единичен антигенен детерминант. Хетерогенността на антителата се отбелязва не само срещу протеинови и полизахаридни антигени, но и срещу сложни, включително конюгирани, антигени и срещу хаптени. Смята се, че хетерогенността на антителата се определя от известната микрохетерогенност на антигенните детерминанти. Хетерогенността може да бъде причинена от образуването на антитела към комплекса антиген-антитяло, което се наблюдава по време на повторна имунизация, разликата в клетките, съставляващи антителата, а също и принадлежността на антителата към различни класове имуноглобулини, които, подобно на други протеини, имат сложна генетично контролирана антигенна структура.

Видове антитела

Пълните антитела имат най-малко два активни центъра и, когато се комбинират с антигени in vitro, предизвикват видими реакции: аглутинация, утаяване, свързване на комплемента; неутрализират токсините, вирусите, опсонизират бактериите, причиняват визуално явление на имунна адхезия, обездвижване, подуване на капсулата, натоварване на тромбоцитите. Реакциите протичат в две фази: специфична (взаимодействие на антитяло с антиген) и неспецифична (едно или друго от горните явления). Общопризнато е, че различните серологични реакции се определят от едно, а не от множество антитела и зависят от техниката на формулиране. Има термични пълни антитела, които реагират с антигена при t ° 37 °, и студени (криофилни), които показват ефект при t ° под 37 °. Има и антитела, които реагират с антигена при ниска температура, а видимият ефект се проявява при t ° 37 °; това са двуфазни, биотермални антитела, на които са назначени хемолизините на Донат - Ландщайнер. Всички известни класове имуноглобулини съдържат пълни антитела. Тяхната активност и специфичност се определят от титъра, авидността (виж Avidity) и броя антидетерминанти. IgM антителата са по-активни от IgG антителата при реакции на хемолиза и аглутинация.

Непълните антитела (не утаяващи, блокиращи, аглутиноидни), подобно на пълни антитела, са в състояние да се свържат със съответните антигени, но реакцията не е придружена от феномена на утаяване, аглутинация и др., Видими in vitro.

През 1944 г. при хора са открити непълни антитела срещу Rh антиген, те са открити при вирусни, рикетсиални и бактериални инфекции по отношение на токсините при различни патологични състояния. Има някои доказателства за двувалентността на непълни антитела. Бактериалните непълни антитела имат защитни свойства: антитоксични, опсонизиращи, бактериологични; в същото време са открити непълни антитела при редица автоимунни процеси - с кръвни заболявания, особено хемолитична анемия.

Непълните хетеро-, изо- и автоантитела могат да причинят увреждане на клетките, а също и да играят роля при появата на лекарствено-индуцирана левко- и тромбоцитопения

Антителата, които обикновено се намират в кръвния серум на животни и хора при липса на ясна инфекция или имунизация, се считат за нормални (естествени) антитела. Произходът на нормалните антибактериални антитела може да бъде свързан по-специално с антигенна стимулация на нормалната микрофлора на организма. Тези възгледи са теоретично и експериментално обосновани от проучвания върху животински гнотобиоти и новородени при нормални условия на живот. Въпросът за функциите на нормалните антитела е пряко свързан със спецификата на тяхното действие. L. A. Zilber (1958) смята, че индивидуалната резистентност към инфекции и в допълнение „имуногенната готовност на организма“ се определят от тяхното присъствие. Показана е ролята на нормалните антитела в бактерицидната активност на кръвта в опсонизацията по време на фагоцитоза. Работата на много изследователи показа, че нормалните антитела са главно макроглобулини - IgM. Някои изследователи са открили нормални антитела в класовете на IgA и IgG на имуноглобулини. Те могат да съдържат или непълни, или пълни антитела (нормални антитела към червените кръвни клетки - вижте Кръвни групи).

Синтез на антитела

Синтезът на антитела протича на две фази. Първата фаза е индуктивна, латентна (1-4 дни), при която антитела и образуващи антитела клетки не се откриват; втората фаза е продуктивна (започва след индуктивната фаза), антитела се намират в плазмените клетки и течността, изтичаща от лимфоидните органи. След първата фаза на образуване на антитела започва много бърза скорост на растеж на антитела, често тяхното съдържание може да се удвои на всеки 8 часа или дори по-бързо. Максималната концентрация на различни антитела в кръвния серум след еднократна имунизация се записва на 5-ия, 7-ия, 10-ия или 15-ия ден; след инжектиране на депозирани антигени - на 21-30-ия или 45-ия ден. След това след 1-3 месеца или повече, титрите на антителата рязко спадат. Въпреки това, понякога ниско ниво на антитела след имунизация се регистрира в кръвта в продължение на няколко години. Установено е, че първичната имунизация с голям брой различни антигени е придружена от появата на първоначално тежки IgM (19S) антитела, след това за кратък период от време - IgM и IgG (7S) антитела и накрая, някои леки 7S антитела. Многократната стимулация на сенсибилизирания организъм с антиген ускорява образуването на двата класа антитела, съкращава латентната фаза на образуване на антитела, времето на синтеза на 19S антитела и насърчава преференциалния синтез на 7S антитела. Често 19S антитела изобщо не се появяват.

Отбелязани разлики между индуктивната и продуктивната фаза на образуване на антитела се установяват при изучаване на тяхната чувствителност към редица влияния, което е от основно значение за разбирането на естеството на специфичната профилактика. Например, известно е, че експозицията преди имунизацията забавя или напълно инхибира образуването на антитела. Облъчването в репродуктивната фаза на образуване на антитела не влияе върху съдържанието на антитела в кръвта.

Изолиране и пречистване на антитела

За да се подобри методът за изолиране и пречистване на антитела, са предложени имуносорбенти. Методът се основава на превръщането на разтворими антигени в неразтворими чрез свързването им чрез ковалентни връзки към неразтворима основа от целулоза, Сефадекс или друг полимер. Методът позволява да се получат високо пречистени антитела в големи количества. Процесът на изолиране на антитела с помощта на имуносорбенти включва три етапа:

1) екстракция на антитела от имунен серум;

2) промиване на имуносорбента от неспецифични протеини;

3) разцепване на антитела от промития имуносорбент (обикновено с буферни разтвори с ниски стойности на рН). В допълнение към този метод са известни и други методи за пречистване на антитела. Те могат да бъдат разделени на две групи: специфични и неспецифични. Първият се основава на дисоциацията на антитела от комплекса от неразтворим антиген - антитяло (утайка, аглутинат). Извършва се от различни вещества; широко разпространен метод за ензимно смилане на антиген или флокулатен токсин - антитоксин амилаза, трипсин, пепсин. Използва се и термично елуиране при t ° 37–56 °.

Неспецифичните методи за пречистване на антитела се основават на изолирането на гама глобулини: гел електрофореза, хроматография върху йонообменни смоли, фракциониране чрез филтриране с гел през Sephadex. Методът за утаяване с натриев сулфат или амоний е широко известен. Тези методи са приложими в случаи на високи концентрации на антитела в серума, например, при хиперимунизация..

Гел филтрацията през Sephadex, както и използването на йонообменни смоли, позволяват отделяне на антитела според размера на техните молекули.

Използването на антитела

Антитела, особено гама глобулини, се използват за лечение и профилактика на дифтерия, морбили, тетанус, газова гангрена, антракс, лептоспироза, срещу стафилококи, бяс, грип и др. При серологичната идентификация на патогените се използват специално подготвени и пречистени диагностични серуми (вж. Микробна идентификация). Установено е, че пневмококи, стафилококи, салмонела, бактериофаги и др., Адсорбиращи съответните антитела, се придържат към тромбоцитите, еритроцитите и други чужди частици. Това явление се нарича имунна адхезия. Доказано е, че протеиновите рецептори на тромбоцитите и еритроцитите, които се унищожават от трипсин, папаин и формалин, играят роля в механизма на това явление. Имунната адхезия зависи от температурата. Той се взема предвид от прилепването на корпускуларен антиген или чрез хемаглутинация поради разтворим антиген в присъствието на антитела и комплемент. Реакцията е силно чувствителна и може да се използва както за определяне на комплемент, така и на много малки (0,005-0,01 μg азот) количества антитела. Имунната адхезия засилва левкоцитната фагоцитоза.

Съвременни теории за образуване на антитела

Съществуват поучителни теории за образуване на антитела, според Крим антигенът участва пряко или косвено във формирането на специфични имуноглобулини и теории, включващи образуването на генетично съществуващи антитела към всички възможни антигени или клетки, синтезиращи тези антитела. Те включват селекционни теории и теорията на репресията - дерепресия, която позволява синтеза на всякакви антитела от една клетка. Предлагат се също теории, които се стремят да осмислят процесите на имунологичния отговор на нивото на целия организъм, като вземат предвид взаимодействието на различни клетки и общоприети идеи за синтеза на протеини в организма..

Теорията за директната матрица на Gaurowitz-Pauling се свежда до факта, че антигенът, влизащ в клетките, произвеждащи антитела, играе ролята на матрица, която влияе върху образуването на имуноглобулинова молекула от пептидни вериги, синтезата на която протича без участието на антиген. "Интервенцията" на антигена се проявява само във втората фаза на формирането на протеиновата молекула - фазата на усукване на пептидните вериги. Антигенът променя крайните N-аминокиселини на бъдещото антитяло (имуноглобулин или неговите отделни пептидни вериги), така че те стават допълващи се към детерминантите на антигена и лесно влизат в контакт с него. Така образуваното антитяло се отцепва от антигена, навлиза в кръвта и освободеният антиген участва в образуването на нови молекули на антитела. Тази теория породи редица сериозни възражения. Не може да обясни формирането на имунологична толерантност; превъзходно количество антитяло, произведено от клетката за единица време от броя на антигенните молекули, многократно по-малки в нея; продължителността на производството на антитела от организма, изчислена през годините или през целия живот, сравнена със значително по-кратък период на задържане на антиген в клетките и т.н. Трябва също да се отбележи, че плазмените или лимфоидните клетки, произвеждащи антитела, не асимилират антигена, въпреки че наличието на нативен антиген или неговия фрагменти в клетки, синтезиращи антитела, не могат да бъдат напълно изключени. Наскоро Гауровиц (F. Haurowitz, 1965) предложи нова концепция, според която антигенът променя не само вторичната, но и първичната структура на имуноглобулина.

Теорията за индиректната матрица на Бърнет - Феннер придоби известност през 1949 г. Авторите му вярват, че макромолекулите на антигена и най-вероятно неговите детерминанти проникват в ядрата на зародишните клетки и причиняват наследствено фиксирани промени в тях, резултатът от които е образуването на антитела към този антиген. Допуска се аналогия между описания процес и трансдукция в бактериите. Новото качество на формирането на имунните глобулини, придобити от клетките, се предава на потомството на клетките в безброй поколения. Въпросът за ролята на антигена в описания процес обаче беше спорен..

Именно това обстоятелство предизвика теорията за естествения подбор на Ерне (К. Джерн, 1955).

Теорията за естествения подбор Ерне. Според тази теория антигенът не е матрица за синтеза на антитела и не причинява генетични промени в клетките, произвеждащи антитела. Ролята му се свежда до селекцията на съществуващи "нормални" антитела, които спонтанно възникват към различни антигени. Това се случва, като че ли: антигенът, попадайки в тялото, намира съответното антитяло, комбинира се с него; полученият комплекс антиген-антитяло се абсорбира от клетки, които произвеждат антитела, а последните получават стимул за производството на антитела от този вид.

Теорията за клонален подбор на Бърнет (Ф. Бърнет) е по-нататъшно развитие на идеята на Ерн за селекция, но не на антитела, а на клетки, които произвеждат антитела. Бърнет вярва, че в резултат на общия процес на диференциация в ембрионалния и постнаталния период, много клонове на лимфоидни или имунологично компетентни клетки се образуват от мезенхимни клетки, които могат да реагират с различни антигени или техните детерминанти и да произвеждат антитела - имуноглобулини. Характерът на отговора на лимфоидните клетки на антиген в ембрионалния и постнаталния период е различен. Ембрионът или изобщо не произвежда глобулини, или ги синтезира малко. Предполага се обаче, че онези клетъчни клонинги, които са в състояние да реагират с антигенните детерминанти на техните собствени протеини, реагират с тях и се унищожават в резултат на тази реакция. Така че клетките, които образуват анти-А-аглутинини при хора с кръвна група А и анти-В-аглутинини при хора с кръвна група В., вероятно ще умрат. Ако въведете антиген в ембриона, той ще унищожи съответния клетъчен клон по същия начин. и новороденото през следващия живот теоретично ще бъде толерантно към този антиген. Процесът на унищожаване на всички клонове на клетки до техните собствени протеини на ембриона завършва в момента на неговото раждане или излизане от яйцеклетката. Сега новороденото има само „своето“ и той разпознава всяко „извънземно“, попаднало в тялото му. Бърнет също така позволява да се запазят „забранените“ клонинги на клетки, способни да реагират с автоантигени на органи, които по време на развитието са изолирани от клетки, които произвеждат антитела. Разпознаването на „извънземното“ се осигурява от останалите клонинги на мезенхимни клетки, на повърхността на които има съответни антидетерминанти (рецептори, клетъчни антитела), допълващи детерминантите на „извънземния“ антиген. Характерът на рецепторите е генетично определен, тоест е кодиран върху хромозомите и не се въвежда в клетката заедно с антигена. Наличието на готови рецептори неизбежно води до реакцията на този клон на клетките с този антиген, следствие от което сега са два процеса: образуването на специфични антитела - имуноглобулини и размножаването на клетките на този клон. Бърнет признава, че мезенхималната клетка, получила антигенна стимулация, в реда на митозата, поражда популация на дъщерни клетки. Ако такава клетка се е настанила в мозъчната субстанция на лимфния възел, тя води до образуването на плазмени клетки, когато се установява в лимфните фоликули - до лимфоцитите, в костния мозък - до еозинофилите. Дъщерните клетки са склонни към соматични необратими мутации. При изчисляване на целия организъм броят на мутиращите клетки на ден може да бъде 100 000 или 10 милиона и следователно мутациите ще осигурят клетъчни клонинги към всеки антиген. Теорията на Бърнет предизвика голям интерес сред изследователите и голям брой експерименти за проверка. Най-важните доказателства на теорията бяха доказателствата за наличието на антитялоподобни имуноглобулинови рецептори върху предшествениците на клетки, произвеждащи антитела (лимфоцити, произведени от костен мозък) и наличието на механизъм за интерцистронно изключване в клетки, произвеждащи антитела, за антитела с различна специфичност.

Теорията за репресията и дерепресията е формулирана от Л. Шилард през 1960 г. Според тази теория всяка клетка, която произвежда антитяло, потенциално може да синтезира всяко антитяло към всеки антиген, но този процес се инхибира от репресора на ензима, участващ в синтеза на имуноглобулин. От своя страна, образуването на репресор може да бъде инхибирано от влиянието на антигена. Силард вярва, че образуването на антитела се контролира от специални не смилаеми гени. Техният брой достига 10 000 за всеки единичен (хаплоиден) набор от хромозоми.

Ледерберг (J. Lederberg) смята, че в гените, отговорни за синтеза на глобулини, има сайтове, които контролират образуването на активни центрове на антитела. Обикновено функцията на тези сайтове се инхибира и следователно има синтез на нормални глобулини. Под въздействието на антиген, както и, вероятно, под въздействието на определени хормони, местата на гена, отговорни за образуването на активни центрове на антитела, се дезинхибират и стимулират и клетката започва да синтезира имунните глобулини.

Според Н. Н. Жуков-Вережников (1972 г.) еволюционните прекурсори на антитела са защитни ензими, подобни на тези, появяващи се в бактериите с придобита антибиотична резистентност. Подобно на антителата, ензимите се състоят от активните (по отношение на субстрата) и пасивните части на молекулата. Поради своята икономичност, механизмът на "един ензим - един субстрат" е заменен от механизма на "единични молекули с променлива част", тоест антитела с променливи активни центрове. Информацията за образуването на антитела се осъществява в зоната „резервен ген“ или в „зоната на излишъка“ върху ДНК. Подобно излишък очевидно може да се локализира в ядрена или плазмидна ДНК, която съхранява „еволюционна информация. който изигра ролята на вътрешен механизъм, който „изготвя“ контрола върху наследствената променливост “. Тази хипотеза съдържа поучителен компонент, но не е напълно поучителен..

П. Ф. Здродовски възлага на антигена ролята на репресор на определени гени, които контролират синтеза на комплементарни антитела. В същото време антигенът, както Здродовски признава, в съответствие с теорията на Selye, дразни аденохипофизата, което води до производството на хормони на растежа (STH) и адренокортикотропни (ACTH) хормони. STH стимулира плазмоцитната и антителообразуващата реакция на лимфоидните органи, които от своя страна се стимулират от антиген, а ACTH, въздействащ върху кората на надбъбречната жлеза, я кара да отделя кортизон. Последното в имунната система инхибира плазмоцитната реакция на лимфоидните органи и синтеза на антитела от клетки. Всички тези разпоредби бяха потвърдени експериментално..

Действието на хипофизата - надбъбречната жлеза върху производството на антитела може да бъде открито само в предварително имунизирано тяло. Именно тази система организира анамнестични серологични реакции в отговор на въвеждането на различни неспецифични стимули в организма.

Задълбоченото изследване на клетъчните промени в процеса на имунологичния отговор и натрупването на голям брой нови факти потвърждава позицията, че имунологичният отговор се осъществява само в резултат на сътрудничеството на взаимодействието на определени клетки. В съответствие с това се предлагат няколко хипотези..

1. Теория за сътрудничество на две клетки. Натрупани са много факти, които показват, че имунологичният отговор в организма се осъществява при условията на взаимодействие на различни видове клетки. Има доказателства, че макрофагите са първите, които асимилират и модифицират антигена, но впоследствие лимфоидните клетки се „инструктират“ за синтеза на антитела. В същото време е показано, че сътрудничеството се осъществява и между лимфоцитите, принадлежащи към различни субпопулации: между Т-лимфоцитите (тимус-зависими, антигенреактивни, произхождащи от тимусната жлеза) и В-клетките (независими от тимуса, прекурсори на клетки, образуващи антитела, лимфоцитите в костния мозък).

2. Теории за сътрудничество на три клетки. Според възгледите на Ройт (I. Roitt) и други (1969) антигенът се улавя и обработва от макрофаги. Такъв антиген стимулира антиген-реактивните лимфоцити, които претърпяват трансформация в бластоидни клетки, които осигуряват забавена свръхчувствителност и се превръщат в дълговечни клетки на имунологичната памет. Тези клетки влизат в сътрудничество с образуващи антитяло прогениторни клетки, които от своя страна се диференцират чрез пролифериране в клетки, произвеждащи антитела. Според Рихтер (М. Richter, 1969) повечето антигени имат слаб афинитет към клетките, образуващи антитела, следователно за производството на антитела е необходимо следното взаимодействие: антиген + макрофаг - обработен антиген + антиген-реактивна клетка - активиран антиген + предшественик на образуваща антитяло клетка - антитяло. В случай на висок афинен антиген, процесът ще изглежда така: антиген + предшественик на клетки, образуващи антитела - антитела. Предполага се, че при условия на многократна стимулация с антиген, последният директно влиза в контакт с клетка, образуваща антитяло или имунологична памет. Тази позиция се потвърждава от по-голямото радиорезистентност на повтарящия се имунологичен отговор от първичния, което се обяснява с различната резистентност на клетките, участващи в имунологичния отговор. Постулирайки необходимостта от триклетъчно сътрудничество в генезиса на антителата, Р. В. Петров (1969, 1970) вярва, че синтезът на антитела ще се случи само ако стволовата клетка (предшественик на образуващата антитяло клетка) едновременно получава обработения антиген от макрофага и индуктора на имунопоезата от антиген-реактивната клетка, т.е. образува се след нейната (антиген-реактивна клетка) стимулация от антиген. Ако стволовата клетка влезе в контакт само с антигена, обработен от макрофага, се създава имунологичен толеранс (виж Имунологичен толеранс). Ако има контакт само между стволовата клетка и антиген-реактивната клетка, тогава се синтезира неспецифичен имуноглобулин. Предполага се, че тези механизми са в основата на инактивирането на незамразени стволови клетки от лимфоцити, тъй като индукторът на имунопоезата, влизащ в алогенната стволова клетка, е антиметаболит за нея (сингенните клетки са клетки с идентичен геном, алогенните клетки са от същия тип, с различен генетичен състав).

Алергични антитела

Алергичните антитела са специфични имуноглобулини, произведени от действието на алергени при хора и животни. Това се отнася до антитела, циркулиращи в кръвта в случай на алергични реакции от незабавен тип. Има три основни типа алергични антитела: сенсибилизираща кожата или реагини; блокиране и хемаглютиниране. Биологичните, химичните и физикохимичните свойства на алергичните антитела на човек са особени (табл.).

Тези свойства рязко се различават от свойствата на утаяващи, комплемент-свързващи антитела, аглутинини и други, описани в имунологията.

Реагиите обикновено се използват за означаване на хомоложни чувствителни към кожата антитела. Това е най-важният тип алергични човешки антитела, основното свойство на които е способността да се провежда пасивна реакция на повишена чувствителност към кожата на здрав реципиент (виж реакцията на Prausnitz-Kustner). Реагитите имат редица характерни свойства, които ги отличават от сравнително добре проучените имунни антитела. Много въпроси относно свойствата на реагентите и тяхната имунологична природа обаче остават нерешени. По-специално, нерешеният въпрос е хомогенността или хетерогенността на реагините в смисъл на принадлежността им към определен клас имуноглобулини.

Блокиращите антитела възникват при пациенти с поллиноза в процеса на специфична хипосенсибилизираща терапия към антигена, чрез който се извършва хипосенсибилизация. Свойствата на този тип антитела наподобяват тези на утаяващи антитела..

Под хемаглутиниращи антитела обикновено се разбира човешки и животински серумни антитела, способни специфично аглутиниращи червени кръвни клетки, съчетани с поленов алерген (индиректна или пасивна реакция на хемаглутинация). Свързването на повърхността на червената кръвна клетка с поленовия алерген се постига чрез различни методи, например, като се използват танин, формалин, два пъти диазотиран бензидин. Хемаглутиниращите антитела могат да бъдат открити при хора със свръхчувствителност към цветен прашец, както преди, така и след специфична хипосенсибилизираща терапия. По време на тази терапия се случва трансформацията на отрицателните реакции в положителни или увеличаване на титрите на реакцията на хемаглутинация. Хемаглутиниращите антитела имат свойството да се адсорбират доста бързо върху червените кръвни клетки, третирани с поленов алерген, особено някои от неговите фракции. Имуносорбенти премахват хемаглутиниращите антитела по-бързо от реагините. Хемаглютиниращата активност също е свързана до известна степен с кожните сенсибилизиращи антитела, обаче ролята на кожните сенсибилизиращи антитела в хемаглутинацията е очевидно малка, тъй като няма връзка между сенсибилизиращата кожата и хемаглутиниращите антитела. От друга страна, има връзка между хемаглутиниращи и блокиращи антитела, както при индивиди, които са алергични към растителен прашец, така и при здрави индивиди, имунизирани с цветен прашец. Тези два типа антитела имат много подобни свойства. В процеса на специфична хипосенсибилизационна терапия се наблюдава повишаване на нивото както на този, така и на друг вид антитела. Хемаглутиниращите антитела към пеницилин не са идентични с чувствителните към кожата антитела. Основната причина за образуването на хемаглутиниращи антитела беше терапията с пеницилин. Очевидно хемаглутиниращите антитела трябва да бъдат причислени към групата антитела, посочена от няколко автори като „свидетели на антитела“.

През 1962 г. Шели (W. Shelley) предлага специален диагностичен тест, основан на така наречената дегранулация на базофилни левкоцити от заешка кръв под влияние на реакция на алерген със специфични антитела. Въпреки това, естеството на антителата, които участват в тази реакция, и връзката им с циркулиращите реагенти не са добре разбрани, въпреки че има данни за връзка на този тип антитела с нивото на реагиране при пациенти с поллиноза..

Установяването на оптимални съотношения на алерген и тест серум е изключително важно на практика, особено в проучвания с видове алергени, информация за които все още не се съдържа в съответната литература.

Следните видове антитела могат да бъдат причислени към алергични антитела на животни: 1) антитела при експериментална анафилаксия; 2) антитела при спонтанни алергични заболявания на животни; 3) антитела, които играят роля в развитието на артровата реакция (като утаяване). По време на експерименталната анафилаксия в кръвта на животните се откриват както общи, така и локални, специални видове анафилактични антитела със свойството да пасивно сенсибилизират кожата на животни от същия вид..

Доказано е, че анафилактичната сенсибилизация на морски свинчета с ливадни поленови алергени от ливаден прашец се придружава от циркулацията на кожата-сенсибилизиращи антитела в кръвта. Заедно с тези хомоложни сенсибилизиращи кожата антитела, като цяло сенсибилизация на морски свинчета с алергени от цветен прашец на прашец, антитела, открити чрез пасивна хемаглутинация с бис-диазотиран бензидин, циркулират в кръвта. Кожните сенсибилизиращи антитела, които извършват хомоложен пасивен трансфер и имат положителна връзка с анафилаксия, се класифицират като хомоложни анафилактични антитела или хомоцитотропни антитела. Използвайки термина "анафилактични антитела", авторите им приписват водеща роля в реакцията на анафилаксия. Започват да се появяват изследвания, потвърждаващи съществуването на хомоцитотропни антитела към протеинови антигени и конюгати при различни видове експериментални животни. Няколко автори идентифицират три типа антитела, участващи в алергични реакции от непосредствен тип. Това са антитела, свързани с нов тип имуноглобулин (IgE) при хора и подобни антитела при маймуни, кучета, зайци, плъхове, мишки. Вторият тип антитела са антитела от типа морски свинчета, които могат да бъдат фиксирани върху мастоцити и изологични тъкани. Те се различават по редица свойства, по-специално, те са по-термостабилни. Смята се, че антителата от тип IgG могат също да бъдат втори тип анафилактично антитяло при хора. Третият тип са антитела, сенсибилизиращи хетероложни тъкани, принадлежащи например на морски свинчета от клас γ2. При хората само IgG антителата имат способността да сенсибилизират кожата на морски свинчета.

При болести по животните са описани алергични антитела в резултат на спонтанни алергични реакции. Тези антитела са термолабилни и имат сенсибилизиращи свойства на кожата..

Непълните антитела се използват в медицинската област при определяне на антигените на редица изосерологични системи (виж Кръвни групи) за установяване на кръв, принадлежаща на конкретно лице в случаи на престъпни престъпления (убийства, сексуални престъпления, пътни инциденти, телесни повреди и др.), Както и изследване на оспорваното бащинство и майчинство. За разлика от пълните антитела, те не причиняват аглутинация на червените кръвни клетки във физиологичен разтвор. Сред тях се разграничават два вида антитела. Първият от тях е аглутиноидите. Тези антитела могат да предизвикат слепване на червените кръвни клетки в протеинова или макромолекулна среда. Вторият тип антитяло са криптаглутиноидите, които реагират при индиректен тест на Кумбс с антихамаглобулинов серум.

За работа с непълни антитела са предложени редица методи, които са разделени на три основни групи.

1. Методи на конлутиране. Отбелязва се, че непълните антитела са способни да причинят аглутинация на червените кръвни клетки в протеин или макромолекулна среда. Като такава среда използвайте АВ серум (несъдържащ антитела), говежди албумин, декстран, биогел - специално пречистен желатин, доведен до неутрално pH с буферен разтвор и др. (Виж Конглотинация).

2. Ензимни методи. Непълните антитела могат да аглутинират червените кръвни клетки, които преди това са били лекувани с определени ензими. За такава обработка се използват трипсин, фицин, папаин, екстракти от хлебна мая, протелин, бромелин и др..

3. Тест на Кумбс с антиглобулинов серум (виж реакцията на Кумбс).

Непълните антитела, свързани с аглутиноидите, могат да проявят ефекта си и в трите групи методи. Антителата, свързани с криптаглутиноиди, не са в състояние да аглутинират червените кръвни клетки не само в физиологичен разтвор, но и в макромолекулна среда, както и да ги блокират в последната. Тези антитела са открити само при индиректния тест на Кумбс, с помощта на който са открити не само антитела, свързани с криптаглутиноиди, но и антитела, които са аглутиноиди.

Моноклонални антитела

От допълнителни материали, том 29

Класическият начин за производство на антитела за диагностични и изследователски цели е имунизиране на животни със специфични антигени и впоследствие получаване на имунни серуми, съдържащи антитела с необходимата специфичност. Този метод има няколко недостатъка, главно поради факта, че имунните серуми включват хетерогенни и хетерогенни популации на антитела, които се различават по активност, афинитет (афинитет към антиген) и биологичен ефект. Конвенционалните имунни серуми съдържат смес от антитела, специфични както за даден антиген, така и за протеинови молекули, които го замърсяват. Моноклонални антитела, получени с помощта на клонинги на хибридни клетки - хибридоми представляват нов тип имунологични реагенти (виж). Безспорното предимство на моноклоналните антитела е генетично предопределеният им стандарт, неограничена възпроизводимост, висока чувствителност и специфичност. Първите хибридоми са изолирани в началото на 70-те години на 20 век, но реалното развитие на ефективна технология за създаване на моноклонални антитела е свързано с проучванията на Кьолер и Милиптейн (G. Kohler, S. Milstein), резултатите от които са публикувани през 1975-1976. През следващото десетилетие е разработено ново направление в клетъчната инженерия, свързано с производството на моноклонални антитела..

Хибридомът се образува при сливането на лимфоцити на хиперимунизирани животни с клетки, трансплантирани от плазмацити с различен произход. Хибридомите наследяват от един от родителите способността да произвеждат специфични имуноглобулини, а от втория - способността да се възпроизвежда неограничено. Клонираните популации от хибридни клетки могат да произвеждат генетично хомогенни имуноглобулини с определена специфичност за дълго време - моноклонални антитела. Най-широко използваните моноклонални антитела, произведени от хибридоми, получени с помощта на уникалната мишка клетъчна линия MORS 21 (RE).

Непреодолимите проблеми на технологията на моноклоналните антитела включват сложността и сложността на получаване на стабилни високопродуктивни хибридни клонове, които произвеждат моноспецифични имуноглобулини; трудността за получаване на хибридоми, произвеждащи моноклонални антитела към слаби антигени, които не са в състояние да индуцират образуването на стимулирани В-лимфоцити в достатъчни количества; липса на определени свойства на имунните серуми в моноклонални антитела, например, способността да се образуват утайки с комплекси от други антитела и антигени, на които се основават много диагностични тестови системи; ниска честота на сливане на лимфоцити, произвеждащи антитела с миеломни клетки и ограничената стабилност на хибридоми в масовите култури; ниска стабилност по време на съхранение и повишена чувствителност на моноклонални препарати на антитела към промени в pH, температура на инкубация, както и към замръзване, размразяване и излагане на химически фактори; трудността за получаване на хибридоми или трансплантируеми продуценти на човешки моноклонални антитела.

Почти всички клетки в популация от клонирани хибридоми произвеждат моноклонални антитела от същия клас и подклас имуноглобулини. Моноклоналните антитела могат да бъдат модифицирани с помощта на методи за клетъчно имунно инженерство. По този начин е възможно да се получат „триоми“ и „квадроми“, които произвеждат моноклонални антитела с двойно предварително определена специфичност, да променят производството на пентамерни цитотоксични IgM до получаване на пентамерни нецитотоксични IgM, мономерни нецитотоксични IgM или IgM с намален афинитет, а също така и антигенно превключване (като същевременно поддържат антигенност) Секреция на IgM до секреция на IgD и секреция на IgGl до секреция на IgG2a, IgG2b или IgA.

Мишовият геном осигурява синтеза на над 1 * 10 7 различни варианта на антитела, които специфично взаимодействат с епитопите (антигенни детерминанти) на протеинови, въглехидратни или липидни антигени, присъстващи в клетки или микроорганизми. Възможно е образуването на хиляди различни антитела към един антиген, различаващи се по специфичност и афинитет; например, имунизацията с хомогенни човешки клетки предизвиква до 50 000 различни антитела. Използването на хибрид ви позволява да изберете почти всички варианти на моноклонални антитела, които могат да бъдат индуцирани към този антиген в тялото на опитно животно.

Разнообразието от моноклонални антитела, получени към същия протеин (антиген), налага определянето на тяхната по-фина специфичност. Характеризирането и селекцията на имуноглобулини с необходимите свойства сред многобройните видове моноклонални антитела, които взаимодействат с изследвания антиген, често се превръщат в по-трудоемка експериментална работа, отколкото получаване на моноклонални антитела. Тези изследвания включват разделянето на набора от антитела в групи, специфични за конкретни епитопи, последвано от подбор във всяка група на най-добрия вариант за афинитет, стабилност и други параметри. За да се определи специфичността на епитопа, най-често се използва методът на конкурентен ензимен имуноанализ..

Изчислено е, че първична последователност от 4 аминокиселини (обичайният размер на епитоп) може да се появи до 15 пъти в аминокиселинната последователност на протеинова молекула. Въпреки това, кръстосаните реакции с моноклонални антитела се наблюдават с много по-ниска честота, отколкото може да се очаква от тези изчисления. Това се случва, защото далеч от всички тези места се експресират на повърхността на протеиновата молекула и се разпознават от антитела. В допълнение, моноклонални антитела откриват аминокиселинни последователности само в специфична конформация. Трябва да се има предвид, че аминокиселинната последователност в протеиновата молекула не се разпределя статистически и местата на свързване на антитела са много по-големи от минималния епитоп, съдържащ 4 аминокиселини.

Използването на моноклонални антитела отвори по-рано недостъпни възможности за изучаване на механизмите на функционалната активност на имуноглобулините. За първи път, използвайки моноклонални антитела, беше възможно да се идентифицират антигенни разлики в протеини, които по-рано серологично неразличими. Установени са нови подтипове и различия в щама между вирусите и бактериите и са открити нови клетъчни антигени. С помощта на моноклонални антитела са открити антигенни връзки между структурите, чието съществуване не може да бъде доказано надеждно с използване на поликлонални (конвенционални имунни) серуми. Използването на моноклонални антитела позволи да се идентифицират консервативни антигенни детерминанти на вируси и бактерии с широка група специфичност, както и щамоспецифични епитопи с голяма вариабилност и променливост..

От основно значение е откриването на антигенни детерминанти с помощта на моноклонални антитела, които индуцират производството на защитни и неутрализиращи антитела към инфекциозни агенти, което е важно за разработването на терапевтични и профилактични лекарства. Взаимодействието на моноклонални антитела със съответните епитопи може да доведе до стерични (пространствени) препятствия за проявяване на функционалната активност на протеиновите молекули, както и до алостерични промени, които трансформират конформацията на активната част на молекулата и блокират биологичната активност на протеина.

Само с помощта на моноклонални антитела беше възможно да се изучат механизмите на съвместното действие на имуноглобулини, взаимно потенциране или взаимно инхибиране на антитела, насочени към различни епитопи на един и същ протеин.

За производството на огромни количества моноклонални антитела по-често се използват тумори на асцит от мишки. Чистите препарати от моноклонални антитела могат да бъдат получени върху среда без серум в ферментируеми суспензионни култури или в диализни системи, в микрокапсулирани култури и устройства като капилярни култури. За да се получат 1 g моноклонални антитела, се изискват приблизително 0,5 l асцитна течност или 30 1 културална течност, инкубирана в ферментатори със специфични хибридомни клетки. При производствени условия се получават много големи количества моноклонални антитела. Значителните разходи за производството на моноклонални антитела са оправдани от високата ефективност на пречистване на протеин върху имобилизирани моноклонални антитела, а коефициентът на пречистване на протеина при едноетапна афинитетна хроматография достига няколко хиляди. Афинитетна хроматография на базата на моноклонални антитела се използва за пречистване на хормон на растежа, инсулин, интерферони, интерлевкини, произведени от щамове на бактерии, дрожди или еукариотни клетки, модифицирани чрез методи на генно инженерство.

Използването на моноклонални антитела като част от диагностичните комплекти бързо се развива. До 1984 г. около 60 диагностични тестови системи, подготвени с помощта на моноклонални антитела, бяха препоръчани за клинични изпитвания в Съединените щати. Основното място сред тях заемат тестови системи за ранна диагностика на бременността, определяне на кръвните нива на хормони, витамини, лекарства, лабораторна и друга диагностика на инфекциозни заболявания.

Формулирани са критериите за подбор на моноклонални антитела за тяхното използване като диагностични реагенти. Те включват висок афинитет към антигена, който осигурява свързване при ниска концентрация на антиген, както и ефективна конкуренция с антителата на приемащия организъм, които вече са свързани с антигените в тестовата проба; ориентация срещу антигенния сайт, обикновено не разпознат от антителата на гостоприемния организъм и следователно не маскиран от тези антитела; ориентация срещу многократни антигенни детерминанти на повърхностните структури на диагностицирания антиген; поливалентност, осигуряваща по-висока активност на IgM в сравнение с IgG.

Моноклоналните антитела могат да се използват като диагностични лекарства за определяне на хормони и лекарства, токсични съединения, маркери на злокачествени тумори, за класифициране и броене на левкоцити, по-точно и бързо определяне на принадлежността на кръвната група, за откриване на антигени на вируси, бактерии, протозои, за диагностициране на автоимунни заболявания, откриване на автоантитела, ревматоидни фактори, определяне на класове имуноглобулини в кръвния серум.

Моноклоналните антитела позволяват успешното разграничаване на повърхностните структури на лимфоцитите и с голяма точност да се идентифицират основните субпойлации на лимфоцитите и да се класифицират в семейства от човешки левкемии и лимфомни клетки. Новите моноклонални реагенти за антитела улесняват определянето на В-лимфоцитите и Т-лимфоцитите, подкласовете на Т-лимфоцитите, превръщайки го в един от простите стъпки за изчисляване на кръвната формула. С помощта на моноклонални антитела, една или друга субпопулация на лимфоцити може да се отстрани избирателно, изключвайки съответната функция на клетъчната имунитетна система.

Разработват се методи за откриване на тумори и техните метастази в целия организъм чрез въвеждане на радиоактивни изотопи, белязани с моноклонални антитела, специфични за туморните антигени. Способността на моноклонални антитела, белязани с радиоактивни изотопи да намират уникални антигенни детерминанти, позволява да се определи размерът и локализацията на миокардния инфаркт. Този подход може да се използва за диагностициране на всякакви други лезии, включително инфекциозен произход (включително паразитни и бактериални процеси).

Обикновено диагностичните препарати на базата на моноклонални антитела съдържат имуноглобулини, белязани с радиоактивен йод, пероксидаза или друг ензим, използван при реакции на ензимен имуноанализ, както и флуорохроми, като флуоресцеин изотиоцианат, използвани в метода на имунофлуоресценцията. Високата специфичност на моноклонални антитела е от особена ценност при създаването на подобрени диагностични продукти, повишаване на чувствителността и специфичността на радиоимуноанализ, ензимен имуноанализ, имунофлуоресцентни методи на серологичен анализ, типизиране на антигени.

Терапевтичното използване на моноклонални антитела може да бъде ефективно, ако е необходимо да се неутрализират токсини от различен произход, както и антигенативни отрови, да се постигне имуносупресия по време на трансплантация на органи, да се индуцира допълваща цитолиза на туморните клетки, да се коригира състава на Т-лимфоцитите и имунорегулацията, да се неутрализират бактериите, устойчиви на антибиотици, пасивна имунизация срещу патогенни вируси.

Основната пречка за терапевтичното използване на моноклонални антитела е възможността за развитие на нежелани имунологични реакции, свързани с хетерологичния произход на моноклонални имуноглобулини. За да се преодолее това, е необходимо да се получат човешки моноклонални антитела. Успешните изследвания в тази насока позволяват използването на моноклонални антитела като вектори за целенасочено доставяне на ковалентно свързани лекарства.

Разработват се терапевтични препарати, специфични за строго определени клетки и тъкани и с насочена цитотоксичност. Това се постига чрез конюгиране на високо токсични протеини, например дифтериен токсин, с моноклонални антитела, които разпознават целевите клетки. Посочени от моноклонални антитела, химиотерапевтичните средства са в състояние селективно да унищожат туморните клетки в тялото, които носят специфичен антиген. Моноклоналните антитела също могат да действат като вектор, когато са вградени в повърхностните структури на липозомите, което осигурява доставянето на значителни количества лекарства, съдържащи се в липозоми, до органи или целеви клетки.

Последователната употреба на моноклонални антитела не само ще увеличи информационното съдържание на обикновените серологични реакции, но също така ще подготви появата на принципно нови подходи към изследването на взаимодействието на антигени и антитела.

Важно Е Да Се Знае От Дистония